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代謝酶抑制作用研究

代謝酶抑制作用研究

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通過代謝酶抑制試驗評價供試品對CYP450、UGT、SULTCES等主要亞酶的抑制作用,了解其直接抑制或時間依賴性抑制(TDI)作用情況,從而評價其可能的代謝性相互作用。

孵育體系

細胞組(zu)分:肝細胞

亞細胞組分:肝、腸(chang)、肺或腎等組織的微粒(li)體、S9或勻漿等

基因重組酶體系

種屬

測試酶系

CYP450:CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D63A

UGT:UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9、2B72B15等(deng)

SULT:SULT1A1、1A2、1A3、1B1、1E1和(he)2A1

CES酶(mei):CES1CES2

其他AADACFMO其他酶(mei)或亞型可應要求提供

供試品測試濃度

5~7個,根據已知的藥效和毒性數(shu)據設計

探(tan)針底物濃度

1個或1-5個(直接抑制常數測定),根據探針底物Km值設計

孵育體系(xi)蛋白(bai)濃(nong)度(du)

亞細胞組分:0.1-1 mg/mL(可根據要求提供不同的濃度)

細胞組分:0.1-2×106 cells/mL

基(ji)因重組酶體系:250 - 500 pmol/mL 0.1-1 mg/mL

孵育時間

直接抑制或TDI IC50 shift:一個預孵育時間點,一個孵育時間點

TDI KIKinact測定預孵育2-5個時間(jian)點(dian)一(yi)個正式孵育時間點

根據不同要求提供

輔(fu)酶因子

NADPHUDPGA(其(qi)他輔酶(mei)因子可(ke)根據要求提供(gong))

分(fen)析方法

LC-MS/MS

數據呈現

探針底物(wu)代謝(xie)產物(wu)相對(dui)生成量

相(xiang)對活性(% of NC)

半數抑制濃度(du)(IC50

抑制活性(%)

IC50偏(pian)移

抑制常數(Ki)

最(zui)大失活速率常數(Kinact

導致半數最大失(shi)活的游離抑制劑濃度(KI)


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